PCR təcrübələrində reagent vitilizasiyasının ətraflı izahı

PCR təcrübələrində reagent vitilizasiyasının ətraflı izahı.

PCR təcrübəsində, reaksiya sistemini əlavə etdikdən sonra qapağı diqqətlə örtürük və reaktiv volatilizasiyanın qarşısını almaq üçün qapağın bağlandığını dəfələrlə təsdiqləyirik. Ancaq bəzən şübhələri də var: Qapağın möhkəm bağlandığını təsdiqlədik, amma təcrübə başa çatdıqdan sonra reaktiv hələ də buxarlanacaq. səbəb nədir?

Əslində, reagent volatilizasiya PCR təcrübələrində ən çox yayılmış problemlərdən biridir və reagent vitilizasiyaya təsir edən bir çox amillər var.

Buxarlanma, PCR təcrübəsi zamanı buna aiddir, reaksiya həlli yüksək temperaturda buxarlanır və sonra su sisini və ya su damlaları yaratmaq üçün şüşənin divarına və ya üst qapağına və ya şüşə qapağının və ya filminin hava boşluğundan qaynaqlanır, nəticədə reaksiya həllinin konsentrasiyasındakı dəyişiklikdə. Dəyişikliklər, reaksiya həlli miqdarı azaldı və bəziləri də qurutmaq üçün buxarlandı, nəticədə etibarsız təcrübələrlə nəticələndi.

1. İsti qapaqlı təzyiq, temperatur

PCR təcrübələrində, ümumiyyətlə reaktiv buxarın kondensasiyasının qarşısını almaq üçün qapağı qızdırırıq. Qızdırılan qapağın temperaturu, buxarların kondensasiyasının qarşısını almaq üçün reaksiya həllinin adətən daha yüksəkdir.

Termal sikler istilik qapaqları təxminən aşağıdakı dörd növə bölünə bilər: tənzimlənən istilik qapaqları, tənzimlənən istilik qapaqları, uyğunlaşma istilik qapaqları və avtomatik istilik qapaqları. Tənzimlənən qızdırılan qapaq barmaq-dar sıxılma xüsusiyyətləri var. Sıx möhkəmlənməsə, reagentlər buxarlanacaq. Kənar buxarlanma, qızdırılan qapaqdakı təzyiqi artıraraq minimuma endirilə bilər. Bəzən aşmaq borusu çimdik və düyməni bükə bilər. Normal şəraitdə, elektrikli ağıllı istilik örtüyü müxtəlif yüksəkliklərin istehlakını avtomatik olaraq aşkar edə bilər, istehlak materialları avtomatik olaraq sıxışdıra bilər və təzyiq vahid və sabitdir, bununla da reaktiv buxarlanma və əl səhvləri azaldır və eksperimental dəqiqliyi və təkrarlılığı azaldır.

2. İstehlak materiallarının deformasiyası

Buxar sızması üçün, əksər insanlar isti qapaq təzyiqinin yetərli olmadığını düşünürlər. İsti qapağın təzyiqi çox vacibdir, ancaq bu yalnız bir cəhətdir. Əslində istehlak materialları da çox vacibdir.

PCR Orifice plitələr, ümumiyyətlə, qızğından sonra genişləndikdən və əzizləşən plastik materiallardan hazırlanmışdır. PCR Obtive plitəsini yerləşdirmək üçün istifadə olunan PCR metal bazasının termal genişləndirilməsi dərəcəsi son dərəcə aşağıdır və PCR orifice boşqab, istilik genişlənməsindən sonra təyyarə boyunca normal olaraq genişlənə bilməz. Durging dövlət, pvers orifice boşqabının səthinə tam əlaqə qurmağı, qeyri-bərabər temperatur və təzyiqlə nəticələnən, PCR orifice boşqabının kənarında reaktiv buxarlanmasına səbəb olan və PCR aşkarlama effekti təsirinə səbəb ola bilməyən üst istilik örtüyünü tam əhatə edir.

3. İstehlak materialları möhkəm möhürlənmir

İstilik qapağının və istehlak materiallarının sıxlığı PCR boru qapağının möhkəm bağlanması demək deyil və PCR-nin keyfiyyəti yaxşı boşqabın keyfiyyəti qeyri-bərabərdir. Yüksək keyfiyyətli istehlak materialları, nozzle və örtük səthi hamar olur və qutunun örtüyünün arxasındakı möhür yaxşıdır və sızma asan deyil. Aşağı istehlak materialları qeyri-bərabər sıçrayış və radial xətlərə malikdir, bu da asanlıqla sızdırmağa və ya hətta quruyur.

Buna görə də, PCR təcrübələrində yüksək keyfiyyətli və uyğun istehlak materialları seçməyə çalışın. Eyni zamanda, reaksiya sistemi sistem buxarlanmasının reaksiyasına təsirini minimuma endirmək üçün genişləndirilə bilər.