Hüceyrə mədəniyyətlərinin cryopreservasiyası üçün əsas göstərişlər

Hüceyrə mədəniyyətlərinin cryopreservasiyası üçün əsas göstərişlər

Hüceyrələr normal böyümə işləri zamanı metabolizmasını davam etdirir, bu da müxtəlif proteqrasiyaların iştirakını tələb edir. Temperatur -70 ° C-dən aşağı düşəndə, işləməyi dayandırır. Buna görə, həddindən artıq dərəcədə aşağı temperatur olan bir mühitdə, hüceyrələr metabolik fəaliyyətlərini dayandıra və uzunmüddətli yaddaşa imkan verən hərəkətsiz bir vəziyyətə girə bilər.

1. Təcrübə materialları

Baza materialı:

Əsas mədəniyyət orta

Serum (Adi FBS / NBS)

Ultrapure Workbench

Steril dimetil sulfoksid (DMSO)

Steril pbs fosfat tampon duz həlli

Kəmsər

Elektrikli pipet

Təcrübələrin hazırlanması

a) Dondurucu həllinin hazırlanması:

Ümumi hüceyrələr: 55% Bazal Orta + 40% Bovine Serumu (FBS / NBS) + 5% DMSO

Vital hüceyrələr: 90% Bovine Serum (FBS / NBS) + 10% DMSO

Hazırlanmış cryopreservation həlli 15 ml sentrifuge borusuna [yuva] və sonrakı istifadə üçün 4 ° C-də saxlayın.

(b) Dondurulmaq üçün hüceyrələrin hazırlanması:

Hüceyrələri dondurmadan əvvəl, yaxşı böyümə vəziyyəti və logaritmik böyümə mərhələsində hüceyrələri seçin və hüceyrə vəziyyətini qorumaq üçün dondurmadan əvvəl təzə orta 12-24 saat ərzində onları dəyişdirin.

2. Təcrübəli prosedur

1. Hüceyrələrin sıxlığını dondurulacaq, bu da təxminən 80% ~ 90%. Köhnə mühiti asmaq üçün bir pipet silahından istifadə edin, hüceyrələri 1-2 dəfə yumaq və qalan mühitdə qalan mühiti çıxarmaq üçün steril pbs əlavə edin.

2. Tripsin hüceyrələrə girməsinə və həzm üçün inkubatora yerləşdirməyə imkan verən müvafiq miqdarda tripsin və ya həzm suyu əlavə edin. Mikroskop altında hüceyrələrin vəziyyətini müşahidə edin: sitoplazm geri çəkilir və hüceyrələr artıq vərəqlərə qoşulmur. Bu anda həzm prosesini dayandırmaq üçün dayanma həllini əlavə edin.

3. Hüceyrə asqısı və 1000 rpm-də hüceyrə asqısı sentrifujini 3-5 rpm olan sentrifug etmək üçün hüceyrələri yumşaq bir şəkildə qablaşdırın.

Fövqəladə atın, hüceyrələrin bərabər sayılması üçün müvafiq miqdarda donma həlli və yumşaq bir boru əlavə edin. Son sıxlığı etmək üçün cryopreservation mühiti ilə hüceyrə sıxlığını tənzimləyin 5 × 106 / ml ~ 1 × 107 / ml.

4. Kriogen boruları gözlənilən tutumuna görə ayırmaq və papaq və möhürləmək üçün avtomatik bir kaplama maşınından istifadə etmək üçün bir pipet silahından istifadə edin.

5. Standard Cryopreservation proqramı -1 ° C-dən -2 ° C-ə qədər bir soyutma dərəcəsidir və dondurulmuş hüceyrələr tədricən aşağıdakı addımlara görə tədricən dondurula bilər: Otaq temperaturu → 4 ° C (20min) → - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (bir gecədə) → maye azotda uzun müddətli anbar.

Bu, bir gecədə bir -80 ° C-də birbaşa bir dondurucuda saxlanıla bilər və sonra anbar üçün maye azota köçürülür.

Yongyue Tibbi, Ar-Ge, Biotibbi istehlak materiallarının istehsalı və satışında ixtisaslaşmış yüksək texnologiyalı bir müəssisədir. Pipette tövsiyələri, Pipetlər, PCR plakası, hüceyrə mədəniyyəti məhsulları və digər bioloji laboratoriya məhsulları. Yongyue tibbi etibarınıza və seçiminizə layiqdir! ConShipe-a xoş gəlmisiniz!